血浆/血清miRNA提取分离试剂盒

产品货号：

WH0128

中文名称：

血浆/血清miRNA提取分离试剂盒

英文名称：

miRsmart Serum/Plasma miRNA Isolation Kit

产品规格：

50次

发货周期：

1～3天

产品价格：

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本试剂盒是专门针对血清、血浆样本miRNA提取而开发的新一代产品。该试剂盒中的裂解液MZA经过长时间研发改良，具有更强的的裂解能力和更高的提取灵敏度，试剂盒中的吸附柱采用特殊的硅基质膜填料，大大增强了其对RNA、尤其是small RNA (<200nt)的吸附能力，提取得到的miRNA纯度更好、质量更高，1h内即可完成所有操作，提取的miRNA没有DNA和蛋白污染。提取产物可用于Northern Blot、Dot Blot、PolyA筛选、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆等常规实验。

产品组成

组分	规格
裂解液MZA	50mL
漂洗液RW	12mL
去蛋白液MRD	24mL
RNase-Free ddH2O	15mL
RNase-Free吸附柱(含2mL收集管)	50套
RNase-Free离心管(1.5mL)	50个

保存：室温，其中裂解液MZA需置于2～8℃避光。

注意事项

预防RNase污染，应注意以下几方面：
- 经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致RNase污染。
- 使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染。
- RNA在裂解液中不会被RNase降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4h，塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10min，然后用水彻底清洗，再灭菌，即可去除RNase。
- 配制溶液应使用无RNase的水(将水加入到干净的玻璃瓶中，加入DEPC至终浓度0.1%(v/v)，放置过夜，高压灭菌)。
第一次使用前应在漂洗液RW和去蛋白液MRD中加入无水乙醇，加入量请参见瓶上标签。

样品处理：每200μL血清或血浆中加入900μL裂解液MZA，振荡器振荡混匀30sec至完全匀浆，颠倒混匀。如需使用检测外参(货号：WH0233)，请于完全匀浆之后、颠倒混匀之前加入(1μM浓度，加入1μL)。
注意：提取样本量建议不要大于200μL，否则会导致RNA产率以及纯度偏低。裂解液的量严格按照说明书加入，如果加入量少会使界相分离不彻底，最终也会导致低的产率与纯度。
室温放置5min，使得核酸蛋白复合物完全分离。
加入200μL氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15sec，室温放置5min。
12000rpm(~13400×g)，4℃，离心15min，样品会分成三层：黄色的有机相，白色的中间层和无色的水相，RNA主要在水相中，把水相转移到新管中，进行下一步操作。
量取转移液的体积，缓慢加入转移液2倍体积的无水乙醇(如：500μL的转移液加1mL无水乙醇)，混匀(此时可能会出现沉淀)。将得到的溶液和沉淀一起转入吸附柱，室温放置2min，室温12000rpm(~13400×g)离心30sec，离心后弃掉流出液，保留吸附柱。
向吸附柱中加入700μL去蛋白液MRD(请先检查是否已加入乙醇)，室温静置2min，室温12000rpm(~13400×g)离心30sec，弃废液。
向吸附柱中加入500μL漂洗液RW(请先检查是否已加入乙醇)，室温静置2min，室温12000rpm(~13400×g)离心30sec，弃废液。
重复步骤7一次。
室温12000rpm(~13400×g)离心2min，弃收集管。
注意：此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，离心后将吸附柱在室温放置片刻，或置于超净工作台上通风片刻，以充分晾干。如果有漂洗液残留，可能会影响后续的RT等实验操作。
将吸附柱转入一个新的RNase-Free 1.5mL离心管中，向吸附膜中心位置加15～30μL RNase-Free ddH2O，室温放置2min，室温12000rpm(~13400×g)离心2min。
注意：洗脱缓冲液体积不应少于15μL，体积过小影响回收效率。且RNA应保存在-70℃，以防降解。如果想提高RNA得率，可重复步骤10一次。

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